殺蟲劑觸殺毒力（LD50）測(cè)定（點(diǎn)滴法）

殺蟲劑觸殺毒力（LD50）測(cè)定（點(diǎn)滴法）

目前使用的殺蟲劑大多數(shù)都具有較強(qiáng)的觸殺作用，所以殺蟲劑的觸殺毒力測(cè)定顯得特別重要。觸殺毒力測(cè)定有藥膜法、點(diǎn)滴法、噴霧法、噴粉法和浸液法等。
室內(nèi)比較精確的觸殺毒力測(cè)定方法是點(diǎn)滴法和藥膜法。本實(shí)驗(yàn)采用點(diǎn)滴法（topical application）。是將一定量農(nóng)藥丙酮液點(diǎn)滴在蟲體的一定部位上，藥劑可能自體壁進(jìn)入體內(nèi)。
目的要求
通過本實(shí)驗(yàn)可以學(xué)習(xí)到一種比較準(zhǔn)確的殺蟲劑觸殺毒力測(cè)定方法，并進(jìn)行有關(guān)毒力數(shù)據(jù)整理及其可靠性檢驗(yàn)。
實(shí)驗(yàn)用具
容量瓶（10、25、50及100ml）、微量點(diǎn)滴器或毛細(xì)管微量點(diǎn)滴器、吸管、培養(yǎng)皿、燒杯、濾紙、平頭鑷子、計(jì)算紙。
實(shí)驗(yàn)材料
乙酰甲胺磷，辛硫磷，丙酮，可選用室內(nèi)人工飼養(yǎng)的粘蟲（Mythimna separta Walker）、玉米螟（Ostrinia furnacalis G）、棉鈴蟲（Heliothis armigera Hubner）或直接采自田間的菜青蟲等4齡幼蟲，荔枝椿象成蟲（Tessaratoma papillosa Drury）也可根據(jù)不同地區(qū)或不同季節(jié)任選一種試蟲。
測(cè)試方法（選用玉米螟為實(shí)驗(yàn)材料）
1) 預(yù)備試驗(yàn)  先用丙酮將乙酰甲胺磷配制成若干個(gè)不同濃度，選取4齡玉米螟幼蟲若干，每個(gè)濃度用點(diǎn)滴器（或微量進(jìn)樣器）點(diǎn)滴藥液于幼蟲的胸部背面，每頭蟲點(diǎn)滴1ul,每濃度點(diǎn)滴蟲數(shù)不少于30頭，待藥液干后，把5－8頭蟲盛于一皿中，加入少量飼料，蓋好培養(yǎng)皿，寫好標(biāo)記，經(jīng)24小時(shí)后檢查試蟲的生存及死亡頭數(shù)，計(jì)算其死亡率。從這些濃度中找出適合的濃度，即找出其死亡率在20－90％之間的5－7個(gè)不同劑量的等比濃度供下一步試驗(yàn)用。
2) 根據(jù)上步預(yù)備試驗(yàn)結(jié)果，如本實(shí)驗(yàn)可用乙酰甲胺磷有如下濃度：500、1000、2000、4000、8000、12000和16000ppm�？稍O(shè)7組，每組選擇4齡玉米螟幼蟲210頭，分別放在墊有濾紙的培養(yǎng)皿中（濾紙預(yù)先加濕），每皿放10頭，每種濃度設(shè)有3個(gè)重復(fù)。
3) 用微量點(diǎn)滴器盛裝藥液，從低濃度到高濃度點(diǎn)滴，每蟲點(diǎn)滴1ul于幼蟲胸部背板處，待藥液揮發(fā)后，添加適量人工飼料于皿中。對(duì)照蟲僅點(diǎn)滴丙酮，其他處理與上不同。
4) 試驗(yàn)觀察及結(jié)果整理  試驗(yàn)期間記錄溫濕度，施藥后24小時(shí)檢查每種處理的生或死蟲數(shù)。統(tǒng)計(jì)各濃度幼蟲的死亡率和校正死亡率％。計(jì)算公式如下：

或
最后采用繪圖法或直線回歸方程求LD50，并用方差分析法檢定其可靠性程度。
例如：乙酰甲胺磷對(duì)玉米螟幼蟲觸殺LD50毒力測(cè)定結(jié)果及檢驗(yàn)。
１．乙酰甲胺磷對(duì)玉米螟幼蟲觸殺結(jié)果（見表6—1）。
2．繪圖法求LD50  此方法以劑量對(duì)數(shù)作橫坐標(biāo)，機(jī)率值作縱坐標(biāo)，繪制直角坐標(biāo)系．在直角坐標(biāo)中找出該次試驗(yàn)的坐標(biāo)點(diǎn)，并用一直線連接起來(lái)，該直線稱“劑量對(duì)數(shù)－死亡率機(jī)率直線”。從機(jī)率值“5”處引一與橫坐標(biāo)平行的直線與“劑量對(duì)數(shù)－死亡機(jī)率直線”相交，以相交點(diǎn)引一線垂直于橫軸，此垂線與橫坐標(biāo)的交點(diǎn)，即為乙酰甲胺磷對(duì)玉米螟LD50的劑量對(duì)數(shù)值，再查反對(duì)數(shù)表，即為L(zhǎng)D50值。（見圖6－1）。
因此，乙酰甲胺磷對(duì)玉米螟4齡幼蟲觸殺毒力LD50為0.0072ug/頭（試驗(yàn)時(shí)如把幼蟲稱重則其單位可為ug/g）。
３．劑量對(duì)數(shù)機(jī)率值直線的驗(yàn)證及LD50的計(jì)算
1) 求直線回歸方程  y=a+bx
2)        求LD50（用回歸直線計(jì)算）。
因?yàn)楫?dāng)機(jī)率y=5時(shí)即為50％的死亡率，所以將y=5代入回歸方程中，即可求出LD50。
3)        方差分析檢定
４. LD50標(biāo)準(zhǔn)誤差和置信區(qū)間（可靠范圍）  上面所求出的LD50是人工飼料飼養(yǎng)的玉米螟幼蟲LD50,其值往往受到所取樣本影響，與昆蟲的群體有一定的差距，即所求的LD50不一定代表群體的實(shí)際情況。因此，還需計(jì)算出LD50的標(biāo)準(zhǔn)誤差以及置信區(qū)間（可能的實(shí)際所在的范圍）。
1）        LD50標(biāo)準(zhǔn)誤差
2）        置信區(qū)間  當(dāng)機(jī)率P=0.05,群體自由度df=∞時(shí),查t表：t0.05=1.96,因此,當(dāng)LD505%最小顯著性差異(LSD)0.05=t0.05(df=∞)×Sm=1.96×0.0328=0.0064.但是,由于Sm是LD50標(biāo)準(zhǔn)誤的對(duì)數(shù)值,要換算成本來(lái)數(shù)值時(shí),不能直接由對(duì)數(shù)表查回,因?yàn)槲覀兦懊嬗玫臅r(shí)log10,因此標(biāo)準(zhǔn)誤差(Sm)由對(duì)數(shù)查回的計(jì)算方法為:LD50×log10×Sm=0.0078×2.3×0.0064=0.0012．因此玉米螟幼蟲群體LD50的95%置信區(qū)間是0.0078±0.0012=0.0089-0.0067ug/頭之間．
習(xí)作
將實(shí)驗(yàn)結(jié)果列成表格，分別用作圖法即回歸方程求LC50或LD50，并且進(jìn)行可靠性的檢驗(yàn)。

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